Sigma:間質(zhì)膠原酶IA,C9891-25MG,CAS: 9001-12-1

屬性：

質(zhì)量水平：200

形式：essentially salt-free, lyophilized powder

specific activity：≥125 CDU/mg solid
0.5-5.0 FALGPA units/mg solid

分子量：68-130 kDa

溶解性：TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble

特色行業(yè)：Diagnostic Assay Manufacturing

運輸：wet ice

儲存溫度：−20°C

應(yīng)用：

該酶還與其他蛋白酶一起被用于分解人類腫瘤、小鼠腎臟、人腦和肺上皮組織。它還在在肝、腎灌注研究、胰腺消化、非實質(zhì)大鼠肝細(xì)胞和肝細(xì)胞分離等方面有應(yīng)用價值。Sigma的該酶用于牛小梁和皮質(zhì)骨I型膠原的消化。它也被用作B組 鏈球菌 細(xì)胞FALGPA檢測的陽性對照。

生化/生理作用：

從組織中有效釋放細(xì)胞需要膠原酶和中性蛋白酶的共同作用。每摩爾膠原酶由4g原子鈣(Ca2+) 酶激活。培養(yǎng)濾液被認(rèn)為含有分子量在68-130 kDa之間的至少7種不同的蛋白酶。最佳pH范圍為6.3-8.8。這種酶通常用于消化組織樣本中的結(jié)締組織成分，以釋放單個細(xì)胞。膠原酶治療會導(dǎo)致一些細(xì)胞死亡。通常，消化濃度從0.1到5 mg/mL不等。為產(chǎn)生令人滿意的細(xì)胞解離效率并不會造成太多的細(xì)胞死亡，其反應(yīng)時間從15分鐘到幾個小時不等。最好使用含有鈣和BSA的Krebs Ringer緩沖液，Zn2+ 是活性必需的。該酶識別序列 -R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-，其中X通常是中性氨基酸。乙二醇雙(β-氨基乙基醚)-N,N,N′,N′-四乙酸(EGTA)4;β-巰基乙醇;谷胱甘肽(還原型));巰基乙酸鈉;2、2′-聯(lián)吡啶;8-羥基喹啉、半胱氨酸具有抑制該酶活性的作用。

每摩爾膠原蛋白酶被4g原子鈣活化。 它被乙二醇-雙（β-氨基乙基醚）-N，NN′,N′-四乙酸，β-巰基乙醇、谷胱甘肽、巰基乙酸和8-羥基喹啉抑制。

注意：

所提供產(chǎn)品可在-20℃穩(wěn)定保存一年。在37℃、50℃和-20℃保存30天，無明顯的FALGPA和蛋白酶活性損失。如果快速冷凍分裝液(10 mg/mL)并保存于-20℃，膠原蛋白酶原液活性穩(wěn)定。反復(fù)凍融會破壞溶液。 本品在冰上置放7小時以上可保留100%活性。

單位定義：

一個膠原蛋白消化單元（CDU）從牛跟腱膠原蛋白中釋放的肽鏈量和1.0 μ亮氨酸，5小時，pH7.4,37℃，在鈣離子存在下的茚三酮顏色相同。一個 FALGPA水解單元每分鐘，25℃，水解1.0 μmole 呋喃基丙烯酰-Leu-Gly-Pro-Ala。一個中性蛋白酶單元水解酪蛋白，產(chǎn)生顏色和1.0 μmole 酪氨酸每5小時，pH7.5,37℃下產(chǎn)生的相同。一個梭菌蛋白酶單元在DTT存在下，pH7.6,25℃，每分鐘水解1.0 μmole BAEE。

制備說明：

該產(chǎn)品相當(dāng)于Mandl,I.,等報道的前40%硫酸銨餾分。（Mandl, I., et al., J. Clin.Invest., 32, 1323 (1953).儲備溶液制備可在37°C下，將1-2 mg/mL膠原酶溶解于含有TESCA緩沖液（含50mM TES，0.36mM氯化鈣，pH 7.4）.

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